简介

免疫电泳（immunoelectrophoresis) 技术是基于抗原的电泳迁移以及与抗体的专一性免疫亲和或沉淀反应来鉴定其强度和特异性。在大部分电泳中，样品中的抗原通过含有相应抗体的 pH 8.6 的薄层琼脂糖凝胶，抗原在 pH 8.6 时通常带强负电，与在含有抗体的凝胶中电泳时发生免疫反应。本实验来源「蛋白质电泳实验技术」主编：郭尧君。

操作方法

溶液的准备

材料与仪器

Tris-巴比妥缓冲液贮液 电极缓冲液 琼脂糖溶液

步骤

1. Tris-巴比妥缓冲液贮液

2.24 g 二乙基巴比妥酸，4.43 g Tris，0.053 g 乳酸钙，0.065 g 叠氮钠，用双蒸水溶解后，在容量瓶中定容至 100 ml。

2. 电极缓冲液

用双蒸水稀释 4 倍。

3. 1% 琼脂糖溶液

选择合适电内渗的琼脂糖，为避免它水化时成团，常将琼脂糖粉撒在上述配制的缓冲液上，煮沸溶解，在 90℃ 水浴上加热，搅拌，直至溶液转为透明。琼脂糖溶液可在 4℃ 贮存几个月，使用前再在 90℃ 水浴上加热溶解。

如果在凝胶溶液中需加抗体，必须在凝胶溶液被冷至 55℃ 后再加，随后立即灌注。

倒胶

材料与仪器

Tris-巴比妥缓冲液贮液 电极缓冲液 琼脂糖溶液

步骤

为使琼脂糖溶液均匀铺层和得到重复的结果，玻璃板必须水平放置。

为便于在免疫电泳中从第一向到第二向的转移，最好使用琼脂糖凝胶支持膜。12 ml 琼脂糖溶液在 84 cm X 94 cm 上的凝胶厚度为 1.5 mm。倒胶后约 3 分钟凝固。待其冷却到室温后，把它放在保湿盒中，使用前在冰箱中放 1 小时，这样可以使凝胶强度增加，防止凝胶破碎。

打孔与加样

材料与仪器

Tris-巴比妥缓冲液贮液 电极缓冲液 琼脂糖溶液

步骤

打孔器直径可为 2.0 mm、2.5 mm、4.0 mm，相应于 1.5 mm 厚度凝胶的样品体积为 2 μl、5 μl 和 10 μl。

最佳加样量为 1~15 μl。加样时，针要插入孔中的所有方向，以防止空气在加样孔中的 “座垫” 作用而使样品溢出凝胶表面。