简介

核蛋白的免疫荧光定位可应用于：（1）定位细胞内核蛋白分布；（2）病毒研究。

操作方法

免疫荧光定位法

原理

免疫荧光细胞化学技术是采用荧光素标记的已知抗体（或抗原）作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原（或抗体），形成的抗原抗体复合物带有荧光素，在荧光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素发出明亮的荧光，这样就可以分辨出抗原（或抗体）的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量，以达到对抗原物质定位、定性和定量测定的目的。

材料与仪器

核蛋白
甲醇 PB 一抗 二抗
显微镜 玻片 盖玻片 滴管

步骤

1.  在22x22 mm 的1.5号盖玻片上培养细胞。理想条件下细胞应长到50%~70%汇合。

2.   在-20℃用100%甲醇固定细胞3分钟。

3.  用PBS + 1% NGS洗三次，每次10分钟。

4.  在湿盒里以适当浓度的一抗室温温育1小时。

5.  用PBS + 1% NGS洗三次，每次10分钟。

6.  在湿盒里与稀释为4 ug/ml 的荧光标记二抗室温温育1小时。

7.  用PBS洗四次，每次10分钟。

8.  用封片剂将盖玻片封在载波片上，用干净的指甲油将盖玻片封边，防止盖玻片滑动。

注意事项

1.  要在盖玻片一边角落做记号，以知道细胞在盖玻片的那一面。

2.  一抗的浓度需要经过实验摸索确定。

3.  第四步中如果用22×22 mm 盖玻片，则在盖玻片上加30 ul 稀释的抗体，并且将盖玻片倒置在玻璃载玻片上，然后将载玻片放到湿盒里，在室温温育。

常见问题

核蛋白是指在细胞质内合成， 然后运输到核内起作用的一类蛋白质。如各种组蛋白、DNA合成酶类、RNA转录和加工的酶类、各种起调控作用的蛋白因子等。核蛋白一般都含有特殊的氨基酸信号序列， 起蛋白质定向、定位作用。

来源《细胞生物学实验手册》