简介

PVDF膜上蛋白的可逆染色可以用于：Western杂交时，确认蛋白是否转至PVDF膜上。

操作方法

PVDF膜上蛋白的可逆染色

原理

丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时也可以与蛋白质的非极性区相结合，从而形成红色的条带。

材料与仪器

蛋白
AmidoBlack isopropanol aceticacid 考马斯亮蓝 methanol Ponceau S in TCA EtOH HAC Na2S2O3 AgO3 Na2CO3 MeOH AgNO3 甲醛
PVDF膜

步骤

1.  氨基黑染色

染液：0.5% Amido Black （w/v）， 25% isopropa nol （v/v） and 10% acetic acid.

染色：将 PVDF 膜置于染液中染色数钟，ddH₂O脱色。

2. 考马斯亮蓝染色

染液：0.1% Coomassie Brillia nt Blue R-250 （w/v） and 50% met hanol （v/v）

脱色液：40% met hanol （v/v） with 10% acetic acid （v/v）

染色：将 PVDF 膜置于染液中染色 15 min.，脱色液脱色。

3.丽春红染色 Ponceau S

染液：0.2% w/v Ponceau S in TCA （3% v/v）

染色：将 PVDF 膜置于染液中染色 5min

脱色：ddH₂O脱色

注意事项

丽春红染色液不适用于尼龙膜上蛋白的检测。

常见问题

丽春红的染色灵敏度不如考马斯亮蓝染色液。