简介

蛋白质纯度的一种较为简单而有效的量度是通过测定经纯化的蛋白质的紫外 (UV）光谱得到的。即使十二烷基硫酸钠（SDS) 凝胶电泳分析表明没有杂蛋白存在, 但蛋白质也可能会含有混杂的核酸。核酸量的粗略估计可由 280nm 与 260nm 的吸收比得到。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

操作方法

纯蛋白质的紫外光谱 A280nm/A260nm实验

材料与仪器

步骤

操作程序

1) 以合适的缓冲液为空白对照，小心测定蛋白质溶液自 210nm 至 340nm 的紫外光谱。

2) 如 310mn 至 340nm 未见吸收（蛋白质在这一区域没有吸收），可简单地测定 280nm 和 260nm 处的吸收值，A_280nm/A_260nm 比应为 1.8~2.0。

3) 如 310nm 至 340nm 可见明显吸收，则是光散射所致（是由于蛋白质大或是聚集作用的结果)，必须用 Leach 和 Sheraga(1960) 法校正 A_280nm 和 A_260nm 值。此法是以吸收值的对数对波长的对数作图，从 310mn 至 340rnn 的吸收值外推, 确定 280nm 和 260nm 处因光散射而造成的吸收值。经校正的 280nm 和 260nm 处的吸收值可用来确定 A_280nm/A_260nm 比, 并从 E(1 mg/ml) 得出蛋白质的浓度（见 P.168)。