脂肪组织和细胞的总蛋白提取

请关注公众号【叨客共享】 在使用网站的过程中有疑问,请来公众号进行反馈哦

简介

提取脂肪组织和细胞的总蛋白

原理

目前生物样品中水油乳化物最难分离,具有独特表面性质的带孔径的离心管柱和优化的无表面活性剂的缓冲液系统,可以快速有效的从脂肪组织匀浆中将水油乳化物分离。提取缓冲液比脂肪组织中的油冰点低,脂肪组织匀浆通过离心管柱能将水相和油相迅速分开,组织中的总蛋白无丢失。蛋白质得率可达 2-3 mg/ml,远远高于其他方法。

应用

生命科学各领域

操作方法

柱式法 Minute TM 脂肪组织和细胞的总蛋白

材料与仪器

【材料】新鲜或冷冻脂肪组织;
【试剂】试剂盒;蛋白提取粉;缓冲液 A、B、C;

步骤

1. 将缓冲液 A,离心管柱和接收管套管放置于冰上预冷。
2. 秤取 50-80 mg 新鲜或冷冻脂肪组织,把它放在几层纸巾上,用拇指和食指挤压,从组织中去除一部分油。用镊子将组织放入试剂盒提供的 1.5 ml 离心管中,秤取 100 mg 蛋白提取粉加入样品中。加入 50ul 缓冲液 A。
3. 用研磨棒扭转研磨组织样品 1-2 分钟成浆状。再加入 200-300ul 缓冲液 A,继续研磨样品 30 秒钟。如果起始组织量较小(20-40 mg)需要加入 100-150ul 缓冲液 A。
4. 盖上盖子,2000rpm 离心 1 分钟。将上清液转移到放置在接收管里的离心管柱中(研磨棒可以重复使用,用酒精擦拭清洁,空气干燥)。
5. 在-20℃,开盖孵育 15-20 分钟。(请确保冰箱温度在-20℃ 附近,否则参照下面的常见问题)
6. 孵育后立刻在 2000rpm,开盖离心 1-2 分钟。弃去离心管柱,所得为脂肪组织中的总蛋白。提取出的蛋白中含有少量不溶物为非水溶性细胞组分。可以将其稀释后直接用于 ELISA 检测水溶性蛋白。也可以用缓冲液 B 或 C 重悬溶解非水溶性蛋白用于下游应用:
A. 在提取出的蛋白溶液中加入 1/10 缓冲液 B 成为变性蛋白溶液(用于 SDS-PAGE,Western 和其他应用)或者
B. 在提取出的蛋白溶液中加入 1/10 缓冲液 C 成为非变性蛋白溶液(用于 IP,ELISA 和其他应用)或者
C. 用 2X 的 2D 胶样品缓冲液溶解用于 2D 分析。

注意事项

注意:缓冲液 A 中含有可能会感染质谱分析的组分。如果提取的蛋白用于质谱分析,在提取前需透析缓冲液,或者用 TCA 法沉淀蛋白。

© 版权声明
THE END
喜欢就支持一下吧
点赞6 分享
评论 抢沙发
头像
请输入有效评论哦,肆意灌水或者乱打评论是不会通过的,会影响您评论后获得资源哦~~
提交
头像

昵称

取消
昵称表情

    暂无评论内容