简介

测定样品中蛋白浓度

原理

BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混合一起即成为苹果绿，即BCA工作试剂。在碱性条件下，BCA与蛋白质结合时，蛋白质将Cu2+还原为Cu+，一个Cu+螯合二个BCA分子 ，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物，最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。

应用

生物科研

操作方法

BCA法

材料与仪器

【器材】 （一） 7220型分光光度计 （二） 恒温水浴箱 （三） 中试管7支 （四） 枪式移液管 【试剂】1、 试剂A：1％BCA二钠盐 2％无水碳酸钠 0.16%酒石酸钠 0.4％氢氧化钠 0.95％碳酸氢钠 混合调PH值至11.25。 2、 试剂B：4％硫酸铜。 3、 BCA工作液：试剂A 100ml ＋ 试剂B 2ml混合。 4、 蛋白质标准液：用结晶牛血清白蛋白根据其纯度用生理盐水配制成1.5mg/ml的蛋白质标准液。（纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定） 5、 待测样品：用双缩脲测定法的样品稀释而成。

步骤

标准曲线的绘制：取试管七支、编号，按下表操作：（表格缺失）https://www.biomart.cn/experiment/430/478/485/57410.htm

注意事项

（一） 绘制标准曲线。 （二） 以测定管吸光度值，查找标准曲线，求出待测血清中蛋白质浓度(g/L)。 （三） 再从标准管中选择一管与测定管光密度相接近者，求出待测血清中蛋白质浓度(g/L)。