简介

来源：《蛋白质与蛋白质组学实验指南》<link />

操作方法

方法A:单层培养的细胞的裂解

原理

培养的动物细胞一般使用温和去垢剂来裂解。如果低浓度的去垢剂就能引起细胞的充分裂解（如1%NP-40或1%TritonX-100)，那么这对目标蛋白的影响可能比匀浆方法更温和。去垢剂的选择必须根据免疫沉淀所用的抗体的识别表位的性质来决定。

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材料与仪器

单层细胞或悬浮细胞
裂解缓冲液 PBS
离心机

步骤

①去掉培养基，并用冷PBS洗细胞2次。

②把培养瓶置于冰上。

③100mm的培养瓶（预冷至4℃)中加入10ml裂解缓冲液，裂解缓冲液的体积应根据培养瓶的大小来调整。

④冰上孵育细胞10〜30min(取决于所孵育的细胞系），并不时地摇动瓶子。

⑤在冰上倾斜瓶子，使缓冲液流向一边，用吸管将裂解液转移到一个微量离心管或其他合适的离心管中。其他培养瓶均如此操作。有些研究者喜欢把细胞从培养瓶中刮下来，但这可能产生细胞张力，只在特殊情况下使用。

⑥4℃条件下20000g离心裂解液10min。

⑦小心地把上清移到另一个试管中，应确保不要碰到沉淀物。将裂解液放置于冰上，以备免疫沉淀所用。细胞裂解液可以使用干冰和乙醇的混合物迅速冰冻，-70℃条件下可以长期储存。但是，通过免疫沉淀分离的蛋白复合物的分析，建议使用新制备的细胞裂解液。

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注意事项

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常见问题

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​方法B:悬浮生长的细胞的裂解

原理

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材料与仪器

细胞

步骤

①细胞在480g的离心力条件下离心10min，弃去上清。

②用冷PBS洗细胞两次，然后将洗过的细胞置于冰上。

③重新悬浮沉淀，使1.0ml裂解液（冷却到4℃)中含大约1X10⁷〜5X10⁷个细胞。

④冰上孵育细胞15min，并不时地振动小管。

⑤4℃条件下20000g离心裂解液10min。

⑥小心地把上清移到另一个小管中，应确保不要碰到沉淀物。将裂解液置于冰上，以备免疫沉淀所用。细胞裂解液可以使用干冰和乙醇的混合物迅速冰冻，-70℃条件下可以长期储存。但是，通过免疫沉淀分离的蛋白复合物的分析，建议使用新制备的细胞裂解液。

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注意事项

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常见问题

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