简介

过氧化物酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能有一定关系，它在代谢中调控IAA水平，并可作为一种活性氧防御物质，消除机体内产生的H2O2的毒害作用。故在科研上常加以测定。

操作方法

植物体内过氧化物酶活性的测定实验

原理

在过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶竭色4－邻甲氧基苯酚，在470nm波长处测定生成物的吸光度（A）值，即可求出该酶活性。

材料与仪器

植物叶片
磷酸缓冲液 愈创木酚
分光光度计 离心机 离心管 研钵 移液管 移液管架 试管 试管架 洗耳球

步骤

一、材料、仪器设备及试剂

1. 材料：植物叶片

2. 仪器设备：分光光度计，离心机，离心管，研钵，移液管，移液管架，试管，试管架，洗耳球。

3. 试剂及配制：

0.1mol·L－1磷酸缓冲液（pH7）。

反应液（100 ml 0.1mol·L－1磷酸缓冲液（pH6）中加入0.5 ml 愈创木酚、1 ml 30﹪H2O2，充分摇匀）。

二、实验步骤

1. 酶液提取

称取植物叶片1g，剪碎置于已冷冻过的研钵中，加入少量石英砂，分两次加入总量为10 ml

pH7磷酸缓冲液，研磨成匀浆后，倒入离心管中，在8000 r / min离心15min，上清液即为粗酶提取液，倒入小试管低温下放置备用。

2. 酶活性测定

吸取反应液3 ml 于试管中，加入酶提取液0.02 ml（视酶活性可增减加入量），迅速摇匀后倒入光径1cm的比色杯中，以未加酶液之反应液为空白对照，在470nm波长处，以时间扫描方式，测定3min内吸光度值变化，取线性变化部分，计算每分钟吸光度变化值（△A470）。

三、酶活性计算

按下式计算酶的相对活性