细胞分裂素对离体子叶的保绿效应实验

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简介

了解细胞分裂素对离体子叶的保绿作用及基本原理和方法。

操作方法

细胞分裂素对离体子叶的保绿效应实验

原理

细胞分裂素可阻碍核酸水解酶和蛋白水解酶的产生,因此能延缓器官衰老,使离体叶片保绿,保绿作用的强弱可通过测定叶绿素含量的变化来衡量,也可由叶色变黄枯死的时间来衡量。

材料与仪器

黄瓜子叶 萝卜子叶
16-BA溶液 95﹪乙醇 CaCO3粉末
电子分析天平 分光光度计 恒温培养箱 恒温水浴锅 25 ml容量瓶 25 ml刻度试管 试管架 移液管 黄瓜子叶的培养皿 瓷盘 刀片 尖头镊子 滤纸 吸耳球

步骤

一、材料、仪器设备及试剂

1. 材料:黄瓜子叶,萝卜子叶。

2. 仪器设备:电子分析天平,分光光度计,恒温培养箱,恒温水浴锅,25 ml容量瓶,25 ml刻度试管,试管架,移液管,黄瓜子叶的培养皿(直径5cm),瓷盘,刀片,尖头镊子,滤纸,吸耳球等。

3. 试剂及配制:100μg· ml-16-BA溶液,95﹪乙醇 ,CaCO3粉末。

100μg· ml-16-BA母液配制:准确称取6-BA 10mg, 加几滴1mol·L-1HC1溶解(可稍加热溶解),然后慢慢加入蒸馏水稀释后定容至100 ml。

二、实验步骤

1. 黄瓜幼苗的培养

精选黄瓜种子,播入垫有滤纸的瓷盘中,加蒸馏水使之湿润(注意种子不能渍水),待种子萌发后,在光下培养2~3d左右,直至子叶绿化。备用。

2. 系列浓度6-BA溶液配制:吸取100μg· ml-16-BA母液,稀释成10、5、0.5

μg· ml-1的系列浓度溶液。

3. 离体黄瓜子叶的培养

3.1取4套培养皿,编号,每套培养皿各垫一张滤纸,分别作0.5、5、10μg· ml-1的6-BA溶液和蒸馏水(CK)4个处理,即为第一组。

3.2 选取子叶大小、生长一致的黄瓜幼苗20株,每处理5 株(10片子叶),用刀片切下不附带叶柄的子叶,分别称取鲜重,将数据记入下表中。然后将子叶放入第一组相应编号的培养皿中,分别加入不同浓度的6-BA溶液3 ml, 对照(CK)加蒸馏水3 ml。盖上培养皿盖,置于暗处,温度25-28℃培养3 d 。

另取与第一组相同的黄瓜幼苗20株,用刀片切下不附带叶柄的子叶作第二组,直接用来测定叶绿素含量。

4. 第二组黄瓜子叶叶绿素含量的测定

4.1叶绿素的提取

取3支25 ml刻度试管,编号。称取第二组的黄瓜子叶三份(3个重复),每份10片子叶,然后放入相应编号的刻度试管中,各加入少量CaCO3粉及95﹪乙醇3-4 ml,用玻棒小心将子叶捣碎后,将试管放入45℃恒温水浴提取叶绿素30min左右,直到子叶碎片无色为止,用滤纸过滤于25 ml容量瓶中(如残渣仍带绿色,可再加几 ml乙醇继续提取,直至残渣无绿色)。滤纸上的色素用乙醇慢慢点滴清洗入容量瓶中,最后定容至刻度,摇匀,待测。

4.2 叶绿素含量的测定

在652nm波长处,以95﹪乙醇为空白对照,测定叶绿素提取液的吸光度(A值)。并按公式计算出叶绿素含量。即为培养前子叶的原始叶绿素含量。

5. 第一组黄瓜子叶叶绿素残留量的测定

第一组黄瓜子叶在暗处培养3d后,按上述第(4)步骤方法分别测定各处理子叶叶绿素含量,并按公式计算出各处理叶绿素含量,即为暗培养后子叶叶绿素含量。

三、结果计算

叶绿素含量计算公式:

四、记录结果

按下表记录实验数据并分析结果
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THE END
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