嗜碱性粒细胞活化的检测—科研工具箱

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转自:“流式咨询”嗜碱性粒细胞活化的检测

暴露于过敏原后嗜碱性粒细胞表面标志物CD63和CD203c的上调,这些可诱导的生物标志物与食物过敏原挑战的结果之间的强相关性被证明是一种有价值的临床工具。

但从血液采集到测量嗜碱性粒细胞活化的数小时的稳定窗口很短,这限制了基于流式细胞术的嗜碱性粒细胞活化测定在临床环境中的使用。

本文检查方法将此窗口延长至1天,以便在实验室之间运输样品。报告结果有几种选项,包括直接报告所有测量值,计算比率和报告涵盖所有测量结果的单个值。这些选项中的每一个对医生都有不同的稳定性和价值。

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图片[1]-嗜碱性粒细胞活化的检测—科研工具箱-叨客学习资料网

肝素抗凝外周全血,过敏原刺激(如花生)或Anti-IgE (BD Bioscience, San Jose, CA)刺激(阳性对照)或PBS未刺激(阴性对照) 后,用anti-CD63-PE (Clone H5C6), anti-CD203c-PECY7 (Clone NP4D6), anti-CD45-AF700 (Clone 2D1), anti-IgE-FITC (Clone Ige21), anti-CD123-PerCPCy5.5 (Clone 6H6), 和 anti-CD193-APC (Clone 5E8) (Thermo Fisher, Waltham, MA) 4°C 染色 30 min。每个抗体滴度确定最佳染色浓度。BD FACS lysis solutions (BD Bioscience, San Jose, CA)裂红。采集至少500个嗜碱性粒细胞(CD123/CD193/IgE阳性细胞)(图1(a))。嗜碱性粒细胞活化是通过测量CD63阳性嗜碱性粒细胞的百分比以及与阴性对照相比CD203c MFI的强度变化来确定的。

检测阈值定义:

  • CD63阳性比例

  • 在CD203c测定中,MFI折叠比

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图片[2]-嗜碱性粒细胞活化的检测—科研工具箱-叨客学习资料网

样品在2-37°C范围内保存或运输1天,结果稳定;对报告结果的建议是,半定量结果,剂量反应曲线的轨迹,CD63 / anti-IgE比率,CD63阳性细胞的百分比和CD203c MFI比率都应提供给临床医生,并附有实验室提供的建议解释。这种解释类似于病理学家关于手术标本组织学的报告。

图片[3]-嗜碱性粒细胞活化的检测—科研工具箱-叨客学习资料网

选择正确的对照,包括用于测量背景激活的PBS对照和用于验证通过IgE / IgE受体通路的功能信号传导的反IgE对照对于结果的解释至关重要。大约10%的患者是IgE / IgE受体途径无应答者(Puan等人,2017)。因此,为了区分无应答样本和非活性样本,建议添加一个额外的管子,用fMLP(f-Met-Leu-Phen)刺激,一种IgE独立的嗜碱性粒细胞激活剂,作为额外的阳性对照(Ebo&Bridts,2009;  Knol等人,1990年)。

样品稳定性的提高,特别是对于功能(输入/输出)测定,将拓宽流式细胞术测试的范围。尽管实验室之间的检测设计会有所不同,但这些数据的实际收集以及临床相关性将对理解食物过敏有助于改善食物过敏治疗产生无价影响。

Reference

Validation of inducible basophil biomarkers: Time, temperature and transportation

https://doi.org/10.1002/cyto.b.21991

 

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