PBMCs中的细胞分类与比例—科研工具箱

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外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞、单核细胞和树突状细胞。目前外周血单个核细胞主要的分离方法是Ficoll-hypaque(聚蔗糖-泛影葡胺)密度梯度离心法。

10ml人外周血大约提取1*107PBMCs。

人外周血作为免疫系统来研究时,通常需要通过密度梯度离心去除红细胞。最常用的是利用Ficoll Paque将全血分成高于和低于1.077g/ml两种密度的组分。

外周血单个核细胞(PBMC)密度较小,位于Ficoll上层,也称为buffy coat。红细胞和包括中性粒细胞和嗜酸性粒细胞在内的多形核细胞(PMNs)密度大于1.077g/ml可被除去。嗜碱性粒细胞的密度在1.077g/ml左右,部分仍然存在于PBMC组分中。

PBMCs包括淋巴细胞(T细胞、B细胞和NK细胞)、单核细胞和DC细胞。在人类中,这些细胞群的比例在个体中有所差异。通常PBMCs中,淋巴细胞占70-90%,单核细胞占10-30%,而DC细胞则只占1 -2%。在淋巴细胞中,CD3+ T细胞占70-85%(在PBMCs中占45 – 70%),B细胞占5-20%(在PBMC中最多15%),NK细胞占5-20%(在PBMC中最多15%)。

CD3+ T细胞由CD4+ T细胞(在PBMCs中占25-60%)和CD8+ T细胞(在PBMCs中占5-30%)组成,两者比例在2:1左右。CD4+ T细胞和CD8+ T细胞可进一步分为幼稚细胞、抗原接触的中枢记忆细胞、效应记忆细胞和效应细胞亚群。

CD4+ T细胞为辅助性T细胞,根据特异性细胞因子、表面分子或转录因子可进一步分为各种功能亚群,包括调节性T细胞、Th1、Th2、Th17、Th9、Tfh和Tr1等亚型。而近年来发现CD8+ 细胞毒性T细胞的表型和功能差异非常大,也许有200种功能表型,因此对其的研究会非常复杂。

在外周血中,B细胞分为过渡期、幼稚、记忆亚群以及浆细胞。DC细胞包括浆细胞样DC细胞(pDC)和髓系衍生的DC细胞(mDC)。单核细胞可分为经典单核细胞和非经典CD16+促炎性单核细胞,后者在单核细胞中最多占10%,具有独特的功能。

人类免疫系统的研究着重于对PBMCs的表型和功能研究。为了通过PBMCs研究人的免疫系统,了解外周血中存在的细胞种类,以及其如何在组织中分化和发挥功能是很重要的。最后,熟悉细胞表面和胞内表型鉴定、以及最适合的检测方法也是非常关键的。

参考资料:https://stemexpress.com/peripheral-blood-mononuclear-cells/

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