通俗易懂:几张图看懂分子间互作的5大实验方法!—科研工具箱

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分子间互作的5大实验方法:①蛋白质-蛋白质   ②蛋白质-RNA   ③蛋白质-DNA   ④蛋白质-DNA/RNA     ⑤RNA-DNA  

 

 

一、蛋白质-蛋白质

1.免疫沉淀(IP)

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2.免疫共沉淀(co-IP)

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3.GST pull-down

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4.co-IP 和GST pull-down区别

①co-IP:研究的是体内自然状态下的蛋白质互相作用,反应的是比较真实的蛋白质相互作用,由于沉淀下来的是蛋白质复合物,不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的。

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②GST pull down:可以确定目的蛋白和检测蛋白是否发生直接相互作用,但是无法得知体内真实的结合情况;

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二、蛋白质-RNA

1.蛋白质与RNA相互作用

①RNA结合蛋白

RNA结合蛋白

微小RNA结合蛋白(如,Ago2)

②RNA

mRNA、lncRNA、circRNA、micRNA

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③RIP:以蛋白为主角,研究RNA与蛋白的互作

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④RNA pulldown:以RNA为主角,研究其与蛋白的互作

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2、RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RIP)

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3.RNA pull down

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RNA pull-down操作手册

 

三、蛋白质-DNA

染色质免疫共沉淀技术(ChIP)

体内研究DNA与蛋白质作用反应细胞内转录因子与启动子Promoter的结合情况。

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四、蛋白质-DNA/RNA

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)

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五、荧光素酶实验

1.启动子活性研究

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2.基因3’UTR区和microRNA结合实验

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六、RNA-RNA Pulldown

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