EMSA实验解析–凝胶电泳也能办大事,用电泳分析分子互作!(核酸-蛋白)—科研工具箱

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一、EMSA基本概念
EMSA:凝胶迁移实验,是一种检测蛋白质和核酸序列相互结合的技术;可用于核酸与蛋白相互作用的定性和定量分析。

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EMSA研究对象:

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、EMSA实验原

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三、EMSA 流程
实验设计

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材料准备:荧光探针合成。目前常用的荧光标记有5(6)-FAM(羧基荧光素)、FITC(异硫氰酸荧光素)标记和 P32放射性同位素标记等。

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材料准备:蛋白的纯化

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材料准备:PAGE胶的配制

◆ 凝胶配制

加入凝胶

凝胶凝结

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孵育电泳

添加体系

样品孵育

上样电泳

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凝胶显影

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四、EMSA 结果分析

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五、EMSA 拓展

EMSA注意事项:

核酸探针避光存放

蛋白样品低温存放

蛋白样品加抑制剂

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样品孵育充分混匀

PAGE凝胶预电泳

上样前冲洗泳道孔

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EMSA实验优点:

  简单快捷:相较于CHIP和RIP,EMSA具有更简单的操作步骤,更短的实验周期,约一天内可完成。

  结果可靠:EMSA实验能较真实的模拟蛋白质与核酸在体内互作的机制与过程。数据重复性好。

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EMSA实验缺点:

  通量低:EMSA一次实验仅能验证少数的核酸序列信息,通量低。CHIP和RIP实验通过目标蛋白分离以及高通量测序,可以得到海量的互作核酸序列信息。

  结果局限:EMSA基于蛋白天然构象与核酸的某一段区域结合而发生相互作用。因此不能找到具体蛋白的何种氨基酸位点或区域,与核酸的片段相互作用。

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