Luciferase 实验解析–只要一点光,就能分析分子互作!(核酸-核酸)—科研工具箱

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一、Luciferase 概念

1、Luciferase 概念

荧光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。

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2、Luciferase 作用

荧光素酶报告基因系统可高效的检测miRNA是否与目的基因启动子区及3’UTR区相互作用。

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二、Luciferase 原理
1、启动子活性原理

荧光信号强度=荧光素酶基因表达=启动子活性

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2、3’UTR 结合原理
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三、Luciferase 流程
1、miRNA与启动子作用流程
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2、miRNA与3’UTR 作用流程
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四、Luciferase 结果

1、双荧光素酶报告系统

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通过检测萤火虫荧光素酶的量来检测目的基因启动子或者3’UTR区域与转录因子调控作用。海肾荧光素酶的量作为内参,来消除细胞数量或者转染效率的差异。
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2、Luciferase 应用实例

荧光信号有无检测转录因子及miRNA与目的基因启动子区域调控作用。

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荧光信号强弱检测 miRNA 与目的基因,UTR区调控作用。

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五、Luciferase 拓展

1、Luciferase 设计原理

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2、Luciferase 注意事项

靶向关系预测,并PCR检测

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细胞培养足量,并设置对照组
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荧光素酶检测试剂避光保存
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荧光信号30s内完成检测
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