分子生物学常用试剂配制—科研工具箱

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DNA电泳试剂

成分及终浓度

配制100mL溶液用量

2mol/L Tris

1mol/L 乙酸 

100 mmol/L 

EDTA 

ddH2O

24.2g 

5.71mL的冰乙酸(17.4 mol/L) 

3.72gNa2EDTA·2H2O 

补足100mL

50×Tris-乙酸(TAE,pH=8.5)缓冲液

注意事项

1. 准确称量各物质,确保缓冲液处于最佳状态。

2. 不要用Tris缓冲液来配制2mol/L Tris,因为常见的Tris缓冲液用了HCl调节pH,成了Tris-HCl缓冲液,使用纯Tris,配制Tris-乙酸缓冲液。


蛋白Western Blotting试剂

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30%丙烯酰胺(29:1)

丙烯酰胺acrylamide

甲叉丙烯酰胺 N’N’-methylene acrylamide

87.6 g

2.4 g

去离子水定容至300 ml, 滤纸过滤避光保存在4℃,保质期1个月。

注:完全避光4℃保存,2年内使用也没什么问题


10% SDS

10g SDS

90ml 去离子水 搅拌溶解

定容至100ml


1.5M Tis-HCL,PH8.8

27.23g Tris-base

80 ml 去离子水

用6N的HCL调节PH值至8.8

定容至150ml,4℃或室温保存


1M Tis-HCL,PH6.8

12g Tris-base

60ml 去离子水

用6N的HCL调节PH值至6.8

定容至100ml,4℃或室温保存


10% 过硫酸铵(APS)

100mg APS

溶于1ml去离子水中

建议新鲜配制,但一般配制好的溶液4℃保存2周没问题

图片

注意事项

1.PMSF剧毒,严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。为了安全和健康,穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。

2. PMSF在水溶液中不稳定。


1%溴酚蓝(bromophenol blue)

加1g溴酚蓝于100ml ddH2O中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。


5X上样缓冲液

Takara公司上的5×SDS-PAGE Loading Buffer配方:

组分浓度:

250 mmol/L Tris-HCl (pH 6.8)

10% (W/V) SDS (电泳级)

0.5% (W/V) 溴酚蓝(BPB)

50% (V/V) 甘油

5-10% (W/V) β-巯基乙醇(2-ME)(使用前加入)

配制量 5 ml

配制方法

1.称量下列试剂置于10ml 塑料离心管中。

1 M Tris-HCl (pH 6.8)

SDS (电泳级)

溴酚蓝(BPB)

甘油

1.25 ml

0.5 g

25 mg

 2.5 ml

2.加去离子水溶解后定容至5 ml,室温保存。

3.使用前加入10% 2-ME(二巯基乙醇),如50 μl的2-ME加到450μl上样液中。

4.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。


10×Tris-甘氨酸缓冲液

成分

配制100mL溶液用量1 L

Tris 

甘氨酸

SDS 

30.2 g 

188 g 

10g

使用时稀释10倍使用


10×转膜缓冲液(10×running buffer) (定容至1L)

Tris

甘氨酸

30.3g

144g

不调pH

使用时稀释10倍使用

1×转膜工作液 (定容至1L,4℃保存)(现配现用)

10×转膜缓冲液

无水甲醇

ddH2O

100ml

200ml

700ml


10×TBS 缓冲液(1L) 

Tris-HCl   

NaCl

24.3g

88g

用浓盐酸约14ml调节pH值至约7.4(pH试纸检测即可)

1×TBST

TBS+Tween-20 0.1%(1ml for 1L)


培养基类

LB培养基

将下列组分溶解在0.9L ddH2O中:

蛋白胨Tryptone

10g

酵母提取物Yeast Extract

5g

氯化钠Nacl

10g


2×YT培养基

将下列组分溶解在0.9L ddH2O中:

蛋白胨Tryptone

16g

酵母提取物Yeast Extract

10g

氯化钠Nacl

5g

注意事项

如需用4M NaOH(约0.5mL)调整pH至7.0,再补足水至1L。分装于锥形瓶并用封口膜进行封口,121℃灭菌20min,4℃保存。

细菌LB固体培养基

  在LB液体培养基的基础上,加入1.5g/100ml琼脂粉Agar, 121℃灭菌20min,降温到60℃,稍微烫手,加入抗生素迅速倒平板,每个10cm平板大约倒10ml,4℃保存三个月。


抗生素类

氨苄青霉素(Amp)(100mg/mL)

    溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的ddH2O中,定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以常50ug/mL终浓度添加于生长培养基。


卡那霉素(kan)(10mg/mL)

     溶解100mg卡那霉素于足量的ddH2O中,定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以50ug/mL终浓度添加于生长培养基。

注意事项

1.以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理,用ddH2O配的用0.45或0.22um无菌过滤器过滤除菌。

2.所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存,也可用锡箔纸包裹。

3.抗生素配制出以后4℃可保存3个月,-20℃可保存一年。


核酸蛋白提取类

RIPA裂解液

成分及终浓度 配制500mL溶液用量

50mM Tris(PH7.5)
150mM NaCl
1%TritonX-100
1%脱氧胆酸钠
0.1%SDS

3.02g
4.38g
5ml
5g
0.5g

      ddH2O至 500ml,调pH值至7.5。混匀后4℃保存,长期保存于-20℃。使用时,加入蛋白酶抑制剂cooktail。


5M NaCl

      称取29.22g氯化钠于100mL烧杯中,加入约80mL ddH2O加热搅拌溶解,定容至100mL,高温高压灭菌后使用,4℃保存。


0.5M EDTA(pH8.0)溶液

      在80mL ddH2O中加入18.612g EDTA-Na2·2H2O,在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH调节溶液的pH值至8.0(约需2.2g NaOH颗粒)然后定容至100mL,分装后高温高压灭菌备用。室温长期保存。

注意事项

       EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。而且配制时最好使用EDTA钠盐(其较易溶于水,而EDTA较难溶于水,易溶于有机溶剂)。


10mg/ml牛血清蛋白(BSA)

加100mg BSA于9.5ml ddH2O中,定容到10ml,分装贮存于-20℃。


1M二硫苏糖醇(DTT)

在DTT 5g的原装瓶中加32.4ml ddH2O,分成贮存于-20℃。


1M HEPES

将23.8gHEPES溶于约90ml的ddH2O中,用NaOH调pH(6.8-8.2),定容至100ml。


1M HCl

加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的ddH2O中。


25mg/ml IPTG

溶解250mg的IPTG于10ml ddH2O中,分装贮存于-20℃。


1M MgCl2

溶解20.3g MgCl2•6H2O于ddH2O中,定容到100ml。


100mM PMSF

溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml,分装避光贮存于-20℃。

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